Фагоцитоз у собак что это
Фагоцитоз у собак что это
Болезни кожи – одна из самых распространенных патологий собак, дифференциальная диагностика которых представляет определенные трудности. По данным различных авторов, более 25 % случаев обращений владельцев собак к ветеринарным специалистам связано с заболеванием кожи, а ее состояние во многих случаях является показателем общего здоровья животного. Актуальность заболеваний кожи, протекающих в форме дерматитов, объясняются их значительным удельным весом в структуре кожных болезней и относительно невысокой эффективностью лечебных мероприятий. Одним из самых распространенных кожных заболеваний является дерматит, не сопровождающийся образованием сыпи. Такие дерматиты возникают чаще всего в возрасте 1–5 лет независимо от пола и породы [9]. Так как городские популяции собак подвергаются интенсивному воздействию «повреждающих» факторов, среди которых обилие стрессов, постоянно ухудшающаяся экологическая обстановка, ненормативное кормление сухими и другими концентрированными кормами, то дерматиты у них регистрируют чаще. Ввоз из-за рубежа производителей, имеющих паразитарные заболевания кожи, а также представителей новых пород собак, также влияет на увеличение числа дерматитов паразитарного происхождения.
Одной из причин кожных заболеваний у собак является паразитирование блох. Питаясь кровью животного, блоха выделяет в дерму слюну, которая препятствует свертыванию крови. Эта слюна содержит более 15 биологически активных веществ, которые могут оказывать раздражающее или аллергизирующее действие [1,3]. До 80 % всех аллергических дерматитов у собак, по данным различных авторов, связано с блохами. Паразитируя на животных, блохи наносят болезненные укусы, в результате образуются папулы, развивается дерматит, часто сопровождающийся секундарной инфекцией [7]. При этом специфические клинические признаки заболевания отсутствуют.
Блошиный дерматит у собак усугубляется еще и тем, что животные интенсивно расчесывают поврежденные участки кожи и нередко заносят в ранки грибковую или бактериальную инфекцию. Что же касается симптомов, то сначала на коже появляются покраснения и отечность. Контактный дерматит сопровождается сильным зудом и жжением, постепенно в месте поражения можно увидеть довольно большие облысевшие участки кожи, покрытые мелкими язвочками или корочками. В последнее время заметно изменилось клиническое течение многих кожных болезней, что еще больше затрудняет их дифференциальную диагностику. Вместе с тем постановка точного диагноза имеет решающее значение в определении прогноза заболевания и тактики лечения, а также подбора оптимальных профилактических мероприятий [7]. Все это требует усовершенствования диагностических методик в пользу постановки этиологического диагноза.
Известно, что при различных патологических состояниях организма, вызванных как физическими, химическими, так и биологическими воздействиями, имеют место существенные сдвиги в различных показателях периферической крови. В клинике кожных болезней приходится встречаться практически со всеми перечисленными факторами, но чаще всего на кожу оказывает воздействие комплекс факторов. В зависимости от сочетания неблагоприятных факторов внешней среды, особенностей организма, его иммунной системы, развития барьерно-защитных механизмов, и в первую очередь кожи, проявляется тот или иной комплекс симптомов и возникают определенные патологические альтерации, укладывающиеся в параметры определенной нозологии. При этом всегда имеют место те или иные сдвиги параметров периферической крови [2]. Однако, несмотря на отмеченное значительное внимание исследователей к функциональной морфологии и отмечаемые значительные сдвиги многих показателей периферической крови [5], ультраструктура эритроцитов при дерматитах паразитарной этиологии изучалась недостаточно.
Эритроцит является самой многочисленной и наиболее дифференцированной клеткой организма человека и млекопитающих животных, тонко реагирующей на все изменения внутренней среды организма, различные физиологические и патологические процессы, что позволяет использовать их в качестве критерия оценки. Ни в одной другой ткани состояние клеточной поверхности не ответственно в такой степени за развертывание ряда явлений, происходящих в организме, как в норме, так и при патологических состояниях [8]. Механизм возникновения эритроцитарных нарушений при дерматитах паразитарной этиологии у собак изучен недостаточно, и раскрытие его имеет существенное значение для целенаправленной патогенетической терапии больных животных.
Цель исследований: изучить резистентность эритроцитов крови собак при блошином дерматите в зависимости от тяжести поражения кожи.
Материалы и методы. В работе было исследовано 97 собак разных возрастных групп и пород с кожной патологией, владельцы которых обратились с жалобами на состояние животных. Всем животным проводили общепринятые клинические исследования. Особое внимание уделяли наличию признаков зуда, его интенсивности, времени появления и характеру экссудатов, наличия местной температуры. При наличии кожных манифестаций проводили микроскопическое исследование кожи методом глубоких соскобов и приготовления мазков отпечатков. Глубокие соскобы с площади около 4 см 2 брали с 5 участков тела каждого животного до появления сочащейся из капилляров крови. С пораженных участков кожи брали 2–3 мазка-отпечатка, которые затем окрашивали азуром и эозином.
Оценку мазка проводили путем подсчитывания количества поверхностных клеток эпителия, глубоких клеток эпителия, нейтрофилов, а также наличия бактерий и грибов в 10 полях зрения с последующим их подсчетом по полям зрения. Исследования проводили под иммерсией светового микроскопа (объектив х90, окуляр х10). Окончательный диагноз ставили по результатам исследования соскобов и мазков отпечатков.
Для оценки фагоцитарного звена системы иммунитета использовали следующие показатели: индекс поглощения, для определения которого подсчитывают число фагоцитов, поглотивших микробные клетки, фагоцитарное число Райта (ФЧ), представляющее среднее число фагоцитированных клеток на один фагоцит.
Поглотительную способность фагоцитов определяли по фагоцитарному индексу Гамбургера путем подсчета под импрессией, используя световую микроскопию, процентного количества поглотивших клетки фагоцитов.
Индекс завершенности фагоцитоза (ИФЗ), рассчитывали по соотношению фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа (отношение соответствующих показателей, изученных через 90 минут контакта, к тем же показателям через 30 минут).
При изучении структуры эритроцитов, использовали методику исследования крови и оценку показателей по методу Долгова В.В., Луговской С.А., с соавт. (2001); Уиллард М., Тведтен Г. С соавт. (2004) [3,10]. Наряду с этим, исследования эритроцитов проводили методом фазово-контрастной микроскопии на микроскопе Leica DM 1000. Статистическую обработку результатов выполняли с помощью программы MedCalc для Windows.
Результаты и обсуждение. В большинстве случаев у обследованных собак блошиный дерматит проявлялся покраснением участков кожи, образованием узелков, кожным зудом, корками, алопециями. При этом специфические клинические признаки болезни отсутствовали. При отсутствии терапии на пораженных участках кожи иногда развивалась вторичная микрофлора с формированием локального, гнойного дерматита или реже – генерализованной пиодермии. Поэтому сбор анамнеза жизни и болезни, а также простое физикальное обследование животного, недостаточны для диагностики дерматитов.
При дерматитах отмечаются нарушения системы гемостаза, пищеварительного тракта, изменения содержания в крови биохимических показателей, изменения со стороны иммунной системы.
Изучение фагоцитарной активности нейтрофилов при блошином дерматите показало, что у собак выявлены глубокие изменения фагоцитарной активности нейтрофилов (табл.1).
Таблица 1
Показатели неспецифической резистентности собак при блошином дерматите различной степени тяжести
Иммунная система Часть 8 Анализы
Иммунная система Часть 8 Анализы
Помимо поражения вирусом иммунодефицита человека, вторичный иммунодефицит развивается после объемных оперативных вмешательств, обширных, тяжелых инфекций, на фоне терапии иммуноподавляющими или сильными противовоспалительными препаратами.
Исследования иммунитета помогают в оценке активности и стадии воспалительного, инфекционного и аллергического иммунного ответов, эффективности проводимой терапии. С этой целью они проводятся неоднократно.
Клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой
Клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой позволяет выявить множество заболеваний. Он отражает состояние гемопоэза – созревания и роста клеток крови в костном мозге. О состоянии иммунной системы говорят уровни белых клеток крови – лейкоцитов и лейкоцитарная формула. Наблюдение за лейкоцитарной формулой в динамике заболевания позволит выявить осложнения, распространение инфекции по организму, реакцию на лечение.
При бактериальных инфекциях можно увидеть повышение лейкоцитов и нейтрофилов с появлением их молодых форм в крови.
При вирусных инфекциях, наоборот, лейкоциты снижаются, а в лейкоцитарной формуле преобладают лимфоциты.
Преобладание тех или иных популяций в лейкоцитарной формуле помогает в диагностике причины воспаления. Например, при определенных инфекциях (например, инфекционный мононуклеоз) нарастают измененные моноциты, а при аллергических и паразитарных заболеваниях – эозинофилы.
Наличие совсем юных клеток (бластов) в крови признак чрезмерной активации костного мозга, а низкий уровень лейкоцитов и нейтрофилов без воспаления – его угнетения.
Лимфоциты, иммунофенотипирование
Выделяют разные популяции лимфоцитов, которые играют ключевую роль в направлении иммунного ответа – клеточный или гуморальный. Определение иммунного фенотипа лимфоцита возможно в специальном исследовании методом проточной цитофлюориметрии. Фенотип лимфоцитов зависит от особых рецепторов на их поверхности – кластеров дифференцировки CD. Наличие того или иного рецептора свидетельствует о принадлежности клетки к определенной популяции лимфоцитов.
Т-лимфоциты (CD3+) общие и их подтипы:
Т- клетки-киллеры (CD3+CD16+CD56+)
Естественные клетки-киллеры (CD3-CD16+CD56+)
Лимфоциты с маркером HLA-DR+
Иммунорегуляторный индекс (Т-хелперы/Т-цитотоксические)
Дополнительно исследуют другие CD маркеры лимфоцитов для определения их активности.
Циркулирующие иммунные комплексы и система комплемента
Антигены связываются специфическими антителами с образованием иммунных комплексов. Последние активируют комплемент, способствуют удалению чужеродных антигенов. Если их слишком много циркулирует в крови, они откладываются в тканях, например почек, кожи, легких. Высокое содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) наблюдается при аутоиммунных, хронических воспалительных и инфекционных заболеваниях. С другой стороны, определение ЦИК в крови неспецифично, не отражает ни причину их нарастания, ни непосредственное влияние на органы.
Снижение уровней ЦИК на фоне лечения говорит о затихании воспалительного процесса и эффективности терапии.
Наиболее распространенными анализами на систему комплемента являются определение ключевых С3 и С4 компонентов. Показаниями для исследования – повторяющие инфекции, ревматические и аутоиммунные заболевания для выявления врожденных дефицитов комплемента, утяжеляющих течение этих болезней.
Исследуют уровни ЦИК, С3-компонент и С4-компонент комплемента.
Иммуноглобулины A, M, G, E
Общие иммуноглобулины – показатели гуморального иммунного ответа. Уровни IgM возрастают в острый период заболевания и при обострении хронической инфекции, IgG – в процессе выздоровления, IgA – в острый период заболевания, сохраняясь дольше IgM, отражают затяжное течение и поражение слизистых оболочек. Повышенные уровни IgE свидетельствуют об аллергическом воспалении.
Общие иммуноглобулины не объясняют причину инфекции, поэтому целесообразно смотреть специфические антитела к конкретным возбудителям. Основные показания для определения общих антител – это подозрение на врожденный иммунодефицит, связанный с гуморальным иммунитетом.
Интерфероновый статус и Интерлейкины
Исследования Интерфероновый статус, Интерлейкин-1бета, Интерлейкин-6, Интерлейкин-8, Интерлейкин-10, Фактор некроза опухоли-альфа и другие определяют уровни цитокинов – специфических маркеров иммунного ответа. Помогают в определении стадии заболевания, врожденных дефектов, онкологических заболеваний, активности воспалительного процесса и осложнений. Как правило, требуют динамического контроля для помощи в оценке клинической ситуации и эффективности лечения.
Фагоцитарная активность
Фагоцитарной активностью обладают нейтрофилы, моноциты-макрофаги и другие клетки. Фагоцитоз – это способность поглощать и переваривать антигены, вплоть до целых клеток. Он определяет возможности врожденного иммунитета и необходим для формирования приобретенного иммунитета. Оценка фагоцитарной активности клеток крови трудоемка и сложна. Используют такие тесты как оценка фагоцитоза бактерий с флюоресцентной меткой, тест по восстановлению нитросинего тетразолия.
Фагоцитарная активность повышается при бактериальных, аутоиммунных, аллергических заболеваниях.
Ее снижение наблюдается при врожденных дефектах фагоцитарной системы, хронических инфекциях.
Иммунограмма – это общее название всех исследований иммунного статуса. И в разных лабораториях включают разное сочетание анализов в зависимости от цели обследования. Для оценки клеточного иммунитета применяют исследование иммунофенотипов лимфоцитов. Для оценки гуморального иммунитета – общие иммуноглобулины, при необходимости дополняя их ЦИК, комплементом и белками острой фазы. Для оценки врожденного иммунитета больше подходят определения цитокинов в крови, фагоцитарная активность.
Гистиоцитарные заболевания у собак и кошек (часть I)
Резюме. Обзор посвящен характеристике заболеваний гистиоцитарного происхождения у мелких домашних животных (собак и котов). Представлены основные сведения о происхождении клеток гистиоцитарной линии гемопоэза, классификация заболеваний гистиоцитарной природы, охарактеризованы основные нозологические формы заболеваний, клиническая картина, морфологическая характеристика клеток в аспекте дифференциальной диагностики, ключевые подходы к терапии.
Summary. The review is devoted to the characterization of histiocytic diseases in small domestic animals (dogs and cats). The information concerning the origin of histiocytic cells, the classification of histiocytic diseases, their main nosological forms, the clinical characteristics, the morphological peculiarities of the tumor cells in the aspect of differential diagnosis, and the main approaches to therapy are presented.
Пролиферация гистиоцитов подразделяется на процессы неопухолевого генеза, доброкачественные опухоли (гистиоцитома) и злокачественные новообразования. Первые два подтипа наблюдаются только у собак.
Опухолевые процессы гистиоцитарного происхождения – частые заболевания у собак, значительно реже они встречаются у кошек. Опухоли возникают из большинства клеток моноцитарно/макрофагального происхождения: макрофагов, интерстициальных дендритных клеток, клеток Лангерганса.
Гистогенез клеток макрофагально/гистиоцитарной линии
Клетки Лангерганса (КЛ). Известны следующие заболевания, возникающие из КЛ, – это гистиоцитома (редко – кожный гистиоцитоз из КЛ) у собак и легочный гистиоцитоз у кошек. В настоящее время доминирует концепция происхождения КЛ в эмбриогенезе из примитивных эритроидно-миелоидных предшественников желточного мешка, а также макрофагов печени плода. Мигрируя в эпидермис кожи, эпителий желудочно-кишечного тракта, бронхолегочной и репродуктивной систем, КЛ формируют стабильную самоподдерживающуюся систему, не зависящую в постэмбриональный период от костномозговых клеток-предшественников. Однако при различных воспалительных процессах, сопровождающихся перемещением КЛ в регионарные лимфатические узлы, для восстановления их популяции в коже происходит дифференцировка в КЛ классических моноцитов (раннее восстановление) и предполагаемых миелоидных предшественников КЛ костного мозга (поздний этап репопуляции). Эти процессы индуцируются действием различных цитокинов. Образующиеся клетки имеют некоторые фенотипические отличия от типичных КЛ, и пока неясно, способны ли они к длительной персистенции. Вопросы гистогенеза КЛ детально изложены в обзорной статье Collin Milne1.
Интерстициальные дендритные клетки (ДК) развиваются из костномозговых предшественников под влиянием колониестимулирующего фактора гранулоцитов/макрофагов (GM-CSF) и интерлейкина-4 (IL-4)2. С их трансформацией связаны такие процессы у собак, как гистиоцитарная саркома, кожный и системный реактивный гистиоцитоз, лейкоз из дендритных клеток; у кошек – прогрессирующий гистиоцитоз, гистиоцитарная саркома. ДК локализуются в коже (в дерме, в отличие от КЛ, которые имеют тропность к эпидермису), Т-клеточной зоне лимфатических узлов и селезенки (интердигитирующие ДК), обнаруживаются во всех органах и тканях за исключением мозговой (но присутствуют в мозговых оболочках и сосудистом сплетении).
Макрофаги возникают в процессе дифференцировки моноцитов в тканях под действием колониестимулирующего фактора макрофагов (M-CSF). Из макрофагов развивается гемофагоцитарная гистиоцитарная саркома у собак и кошек.
Три клеточных источника опухолей гистиоцитарного происхождения различаются по гистогенезу, активации дифференцировочных программ и, как следствие, спектру экспрессирующихся антигенов (табл. 1). Отличительной особенностью всех представителей кроветворных клеток является экспрессия белков семейства β-2 интегринов (CD11/CD18)3 4. Это гетеродимеры, состоящие из двух ковалентно не связанных полипептидных цепей (альфа и бета-2) и обеспечивающие адгезию клеток к эндотелию и другим клеткам иммунной системы. Альфа-цепи могут быть различными (CD11a-d) в зависимости от типа клеток. Альфа-цепь CD11c экспрессируется КЛ и интерстициальными ДК (интерстициальные ДК дермы также экспрессируют CD11b). Для макрофагов характерна экспрессия CD11b и CD11d (в костном мозге и в красной пульпе селезенки). С целью выявления антигенов CD11b, CD11c, CD11d и CD18 (β-2 цепь) у собак в настоящее время используются моноклональные антитела (МкАТ), в частности производства компании Bio-Rad, USA, которые также перекрестно реагируют с соответствующими молекулами клеток у кошек.
Присутствие антигена CD1а отражает функцию гистиоцитарных клеток, а именно представление антигенов клеткам иммунной системы и инициацию иммунного ответа.
Основными антигенпрезентирующими клетками являются КЛ. Экспрессия CD1а на их мембранах выражена в наибольшей степени (на ДК – вариабельна, на макрофагах – низкая или отсутствует). CD1а представлен на мембране в комплексе с β-2-микроглобулином и презентирует собственные и микробные антигены липидного происхождения5.
Распознавание углеводных структур в составе гликопротеинов осуществляется с помощью лектинов. Специфичным для КЛ является маннозоспецифичный лектин лангерин (CD207) (для выявления у собак доступны МкАТ ENZ-ABS239-0100 Enzo Life Sciences и DDX0360P-100 Novus Biologicals), отсутствующий на ДК и макрофагах6. Интернализация лангерина связана с формированием гранул Бирбека (образования в цитоплазме, напоминающие по форме теннисные ракетки, видимые при электронной микроскопии), которые характерны для КЛ человека и большинства видов животных за исключением собак. Предполагают, что это связано с нарушением функциональных свойств лангерина у собак и, возможно, обуславливает предрасположенность к развитию опухолей из КЛ4. Специфичным для ДК является лектин DC-SIGN (CD209), отсутствующий на мембране КЛ и макрофагов (МкАТ DC-SIGN-CD209 Novus Biologicals). Ряд лектинов экспрессируется как на КЛ, так и на ДК: CD205, дектин-1(dectin-1), дектин-2 (dectin-2 ), CD206 (последний выявлен также на мембране макрофагов)7.
КЛ и ДК различаются по наличию экспрессии E-кадгерина (молекула адгезии) и антигена CD90 (антиген Thy-1, функция которого окончательно не установлена, но предполагается его участие в межклеточной адгезии)4. Таким образом, проводя иммунофенотипирование, можно достаточно точно определить клеточное происхождение различных заболеваний гистиоцитарной природы.
Заболевания, развивающиеся из КЛ
Фото 1–7. Пациенты с гистиоцитомой.
Течение заболевания доброкачественное в подавляющем большинстве случаев. Спонтанная регрессия опухоли по достижении ею максимального размера происходит в интервале от 3 недель до 3 месяцев. Регрессия опухоли сопровождается первоначальной инфильтрацией CD4+ Т-лимфоцитами, которые активно секретируют цитокины, способствующие активации металлопротеиназ, расщеплению белков межклеточного матрикса и базальной мембраны и последующей экспансии противоопухолевых эффекторных клеток – цитотоксических CD8+ Т-лимфоцитов13 14. На клетках гистиоцитомы снижается экспрессия Е-кадгерина (степень снижения коррелирует с выраженностью регрессии опухоли)15. Исследование морфологического субстрата в период регрессии гистиоцитомы с учетом присутствия большого количества лимфоцитов, а также плазматических клеток и нейтрофилов (в меньшей степени) в ряде случаев требует проведения дифференциального диагноза с неэпителиотропной Т-клеточной лимфомой.
Описаны единичные случаи метастазирования гистиоцитомы в лимфатические узлы. Faller et al.16 предоставили данные о 8 животных с гистиоцитомой (подтвержденной иммуногистохимическим исследованием) и наличием метастазов в регионарные лимфатические узлы. Поиск проводился по базам данных лаборатории IDEXX и университета Калифорнии за периоды 1994–2001 гг. и сентябрь 2012 – август 2013 гг. У семи животных наступила полная регрессия опухоли и нормализовалось состояние лимфатических узлов, только у одного пациента заболевание прогрессировало (эвтаназия через 2 недели после постановки диагноза). Данные о последующем течении заболевания были доступны для пяти животных: четверо пациентов живы, рецидива гистиоцитомы не было (время наблюдения – 318, 570, 1003 и 1682 дня), одно животное погибло из-за других причин (рецидива заболевания не было). Авторы делают вывод о хорошем прогнозе заболевания даже в случае метастазирования опухоли в лимфатические узлы.
Тактика лечения гистиоцитомы выжидательная. В случае длительной персистенции опухолевого очага показано хирургическое иссечение. Не рекомендуется применение кортикостероидной терапии, которая индуцирует гибель лимфоцитов и может препятствовать развитию противоопухолевого ответа и регрессии ткани опухоли.
Кожный гистиоцитоз из КЛ характеризуется наличием множественных очагов, возвышающихся над поверхностью кожи, значительно варьирующихся по размеру и сопровождающихся покраснением, изъязвлением кожи, алопецией. В ряде случаев наблюдается поражение кожно-слизистых переходов, слизистой ротовой полости, лимфатических узлов, внутренних органов. К настоящему времени описаны единичные случаи заболевания17-21. Среди заболевших животных преобладают шарпеи (20 % среди всех выявленных случаев)4. Морфологический субстрат не отличается от такового при гистиоцитоме, но могут наблюдаться более выраженная анизокория и многоядерные клетки. Иммунофенотипическая характеристика клеток гистиоцитом и кожного гистиоцитоза идентична.
Спонтанная регрессия очагов поражения происходила у половины животных, но она была значительно замедленной (до 10 мес.). В других случаях животные были подвергнуты эвтаназии ввиду длительной персистенции очагов, их изъязвления, присоединения вторичной инфекции, появления отдаленных метастазов.
Существенного эффекта от проводимой терапии (циклоспорин А, препараты нитрозомочевины, левамизол, ломустин, гризеофульвин) не наблюдалось.
Легочный гистиоцитоз из КЛ у кошек – редкая форма патологии. К настоящему времени диагноз «легочный гистиоцитоз» был поставлен посмертно нескольким животным в возрасте 10–15 лет, однако не исключено, что столь низкая частота встречаемости заболевания связана с трудностями его прижизненной диагностики4 22.
Клинические признаки обусловлены синдромом дыхательной недостаточности. Рентгенологически выявляется диффузное затемнение или мелкоочаговые множественные поражения всех легочных долей. Опухолевые очаги также могут присутствовать в трахеобронхиальных лимфатических узлах, ткани печени, почек, поджелудочной железы. Морфологический субстрат представлен скоплениями клеток среднего размера, значительно варьирующимися по размеру и форме ядер, с обширной светлой гомогенной цитоплазмой, экспрессирующими антигены CD1a, CD1c, CD11b, CD18, антигены гистосовместимости II класса, Е-кадгерин.
На сегодняшний день эффективной терапии заболевания не разработано. Прогноз неблагоприятный.
В медицинской литературе описан положительный ответ на терапию стероидами (преднизолон в дозировке 0,5 мг/кг 1 раз в день). Также в публикациях терапии небольшого количества пациентов с системным вовлечением других органов описана положительная динамика при различных протоколах химиотерапии винбластином, метотрексатом, циклофосфамидом, этопозидом, этанерцептом, 2-хлордезоксиаденозин (2-chloro- deoxyadenosine).