Фермент папаин что это
Что такое папаин
Время чтения: 10 мин.
Папаин: польза, вред
Фермент нужен не только пищеварительной системе — папаин входит в состав антивозрастных косметических средств, биологически активных добавок для отличной работы пищеварительной системы.
Функции папаина
Бонус для желающих похудеть или избавиться от лишнего жира — папаин расщепляет жиры (они же липиды) и ускоряет регенерацию мышц. Это значит, что тренировки будут эффективнее, а потеря объемов быстрее.
Кроме пользы природное соединение таит опасность. Есть несколько факторов, которые нужно знать перед применением препарата:
Папаин: зачем нужен
Представьте, что вместе с хорошим пищеварением вы избавляетесь от мимических морщин. Круто же! Тем более, что добывается исключительно из фрукта папайи, а не синтезируется в лабораториях. Вещество активно используется в процессе изготовления пищеварительных ферментов, косметических средств, антигельминтных препаратов, бактериостатических веществ и т.д. Широкое применение вещество нашло из-за уникальности свойств и отсутствия побочных эффектов.
Папаин: где есть
В большом количестве соединение встречается в экзотическом фрукте папайя, который произрастает в Гавайях и на побережье Индийского моря. Второе место по количеству занимают: манго, ананасы, банан и киви.
Но, чтобы получить нужное количество папаина из фруктов придется съедать не менее килограмма в день, а это не очень полезно, мягко скажем.
Чтобы употребление приносило пользу, а дозы было легко контролировать есть биодобавки к рациону, такие как Toxic Free!
Папаин: как принимать
Вещество следует употреблять во время еды, не допускается приём на голодный желудок.
Панкреатин – синтетический препарат, обладающий ферментативной активностью, предназначен для скорого расщепления белков и жиров, трудноперевариваемой пищи. Назначается докторами для лечения: панкреатита, ферментативной недостаточности, гастрита. Панкреатин купить за 100 рублей можно в каждой аптеке.
Папаин и панкреатин
Что делать, если пищеварение нуждается в поддержке? Панкреатин — лекарственное средство, которое назначается лечащим врачом, а самолечение, как известно, может быть опасно. В этом случае папаин станет отличным решением.
Что выбрать: панкреатин или папаин
Панкреатин существует на рынке больше 10 лет. Отечественный, дешевый препарат по эффективности не уступает новым лекарствам. Но, получает его из материалов животного происхождения и рядом побочных эффектов.
Папаин – новый аналог ферментативного средства, изготовленные на растительной основе, что снижает риск появления побочных эффектов.
Вывод — делать осознанный выбор! Для профилактики и улучшения самочувствия можно и нужно прибегать к приему папаина, а о бонусах мы уже писали выше. Если же ситуация связана с назначениями врача, то рекомендуем их придерживаться и обсуждать вопрос замены панкреатина. Помните, выбор за вами — учитывайте побочные эффекты и думайте стратегически о своем здоровье!
Папаин: противопоказания и чем полезен
Папайя – это не только вкусный фрукт, но и источник массы полезных веществ и микроэлементов. К таким относится растительный фермент папаин, который ускоряет взаимодействие веществ с водой. Он способствует разложению белков, пептидов и сложных аминокислот.
Папаин в большом количестве присутствует в необработанной папайе. Народные целители полюбили фрукт за способности улучшать пищеварение, уменьшать боль и останавливать воспалительные процессы.
Как попадает и выводится из организма
При наружном нанесении вещество не попадает в организм и действует только на поверхности.
При употреблении в форме порошка для приготовления раствора или таблеток, всасывается через ЖКТ. Продукт распада выводится через мочевыводящую систему спустя 6-8 часов.
Как работает
Плод дынного дерева содержит большое количество ферментов: папин, химопапаин группы А и В, пептидазу. Самое большое количество веществ содержится в еще незрелых плодах женского пола, листьях, корнях и соке.
Папаин разрушает длинные цепочки аминокислот на короткие и расщепляет сложные белки на простые.
Польза для организма от плодов дынного дерева в их ранозаживляющем и противомикробном действии.
Как применять
Мазь Папаин-Актив наносится массажными движениями на спину, плечи, поясницу и шею. Необходимо втирать до полного впитывания геля.
Процедура проводится перед сном. Идеально, если перед этим проводилась процедура электрофореза с использованием раствора Карипазим.
При наружном применении геля с папаином нет риска передозировки. Единственный возможный побочный эффект – аллергическая реакция, обусловленная личной непереносимостью веществ в составе геля.
Папаин в таблетках – это разновидность БАД. Как самостоятельный препарат он не рассматривается и используется в составе комплексной терапии.
Максимальная дозировка папаина для взрослого – 500 мг, минимальная 45 мг. Прием таблеток должен осуществляться в соответствие с предписаниями, и зависит от концентрации вещества в 1 таблетке, принимается 1-2 штуки 3 раза в сутки не зависимо от приема пищи.
Чем полезна
Папаин – это ценное открытие для современного человека. За что же специалисты так любят этот растительный фермент?
Расщепляет белки до состояния, приемлемого для легкого усваивания. Это особенно важно при болезнях ЖКТ и периодах восстановления после операции.
Активное вещество ускоряет заживление и положительно влияет на регенерацию тканей.
Фермент обладает жаропонижающими свойствами и входит в состав натуральных средств против повышенной температуры.
Папаин уничтожает вредоносные микробы, может приниматься внутрь или наружно.
Обладает ярко выраженным антигельминтным свойством.
Это эффективное слабительное, а также желче- и мочегонное средство.
Благодаря тому, что фермент улучшает работу кишечника, его сравнивают с про- и пребиотиками.
Папаин стимулирует работу иммунитета, повышает устойчивость организма перед болезнями и вирусами.
Активно используется в косметологии благодаря своему омолаживающему эффекту.
Помогает формированию мышц.
Папаин используется в косметологии, фармакологии и пищевом производстве.
При каких заболеваниях применяется
Медицина – главная отрасль применения папаина. Фермент может быть назначен при лечении следующих заболеваний:
панкреатит, язва, метеоризм, запоры;
бронхитов, пневмонии, ОРВ, ОРЗ.
болезней моче-половой системы: циститы, простатит, спайки.
Папаин используется при лечении грыжи. Фермент благоприятно действует на соединительные ткани, облегчает боль и уменьшает воспаление.
Фермент добавляется в зубную пасту и даже в крем после эпиляции.
Что такое препарат Карипазим
Представляет собой белый или немного желтоватый порошок. Его соединяют с небольшим количеством воды и применяют наружно.
Рекомендуется применять при ожогах и открытых ранах для скорейшего их заживления.
Салфетку, смоченную раствором Карипазима и новокаина прикладывают на пораженный участок и накрывают повязкой, устойчивой к влаге. Перевязка делается каждый день.
Противопоказания
Препарат не рекомендуется использовать беременным женщинам и в период кормления грудью.
Строго противопоказан при личной непереносимости веществ в составе лекарства.
Случаев с передозировкой не случалось. Из побочных эффектов – возможно появление аллергической сыпи, крапивницы.
Препарат запрещается использовать детям до 6 лет. Для детей постарше необходима предварительная консультация врача.
Какие результаты дает лечение
Карипазим – это растительный препарат, который ускоряет восстановление отмерших клеток и разжижает кровь.
Препарат используется при межпозвонковой грыже и дает свои результаты:
Хрящи и грыжа становятся мягче и податливее.
Проходит болевой синдром.
Высвобождаются ущемленные нервы.
Происходит ускоренная регенерация поврежденных тканей.
При лечении грыжи не стоит пренебрегать гимнастикой, плаванием и использованием других медикаментов.
Какие преимущества у препарата Карипазим
Эффект от лечения становится заметным только после длительного курса. Но как дополнительный препарат, Карипазим имеет свои плюсы:
применяется только наружно;
используется при электрофорезе и легко комбинируется с другими способами лечения;
обладает рассасывающим эффектом.
Препарат изучался в НИИ им.Бурденко. Доктор медицинских наук Найдин В.Л. запатентовал технологию использования лекарства и установил:
Ферменты в составе препарата благотворно влияют на грыжу посредством электрофореза.
Увеличивается высота межпозвоночных дисков, происходит омоложение клеток.
Снимает напряжение с мышц спины и конечностей.
Не оказывает вредного воздействия на другие органы.
Статистика говорит о том, что у 45% людей, которым была назначена операция, после полного курса процедур отпала такая необходимость. Эффективность лечения составляет 85%.
Все представленные на сайте материалы предназначены исключительно для образовательных целей и не предназначены для медицинских консультаций, диагностики или лечения. Администрация сайта, редакторы и авторы статей не несут ответственности за любые последствия и убытки, которые могут возникнуть при использовании материалов сайта.
Папаин
Это один из наиболее известных растительных ферментов протеазов. Его основная функция в организме заключается в расщеплении белков на аминокислоты.
Продукты богатые папаином:
Общая характеристика папаина
Вещество было обнаружено в конце ХIХ века. Папаин – протеолитический растительный фермент, аналогичный по действию пепсину. Отличается от человеческих ферментов пепсина и трипсина своей универсальностью. Обладает высокой активностью, как в кислой, так и в щелочной среде.
Папаин получают из папайи (дынного дерева). В зеленых плодах папайи содержится намного больше папаина, чем в спелых. Однако в пищу употреблять незрелую папайю медики все же не советуют. Папаин находится во всем растении папайи, даже в листьях и черенках. Исключение составляют только корни.
Папаин активно применяют в кондитерском деле, виноделии, пивоварении, сыроварении и т.д. Он используется для осветления напитков, часто применяется в пищевой промышленности для приготовления мясных продуктов с целью их смягчения.
Папаин входит в состав многих медицинских препаратов, начиная от таблеток и капсул для улучшения пищеварения и заканчивая кремами и гелями самого разного назначения. Например, гель «Папаин актив» используется для электрофореза. Также папаин используется в спортивном питании, косметологии, входит в состав многочисленных БАДов.
Суточная потребность в папаине
Здоровый человеческий организм способен вырабатывать ферменты самостоятельно в необходимых количествах. Рекомендуемая дозировка при дополнительном принятии папаина составляет около 200-300 мг в день.
Потребность в папаине возрастает:
Потребность в папаине снижается:
Усваиваемость папаина
Папаин усваивается здоровым человеком на 6-10%.
Полезные свойства папаина и его влияние на организм
Папаин оказывает комплексное благотворное влияние на организм. Это вещество улучшает пищеварение, снимает воспаления. Оказывает антибактериальное, противогельминтное, усиливающее иммунитет воздействие на организм.
Папаин улучшает работу пищеварительной системы, особенно, если у человека имеются проблемы с перевариванием белков, нормализует перистальтику и способствует более быстрому продвижению пищевого комка.
Благодаря действию папаина остатки пищи не скапливаются на стенках кишечника и быстрее выводятся из организма. Папаин способствует устранению отдышки и тяжести, вздутия, газов.
Влияние папаина распространяется не только на пищеварительную систему, но и на все ткани и кровеносную систему. Он имеет важнейшее значение для разрушения отмерших, чужеродных и вредных для организма элементов.
Папаин снимает жар; заживляет раны; очищает организм; нормализует обмен веществ, нормализует массу тела; омолаживает все клетки, благотворно влияет на состояние кожи.
Кроме того, он оказывает комплексное воздействие на систему иммунитета. Папаин активно устраняет вредные и чужеродные нам белки, клетки-килллеры, участвует в синтезе интерлейкина 1 и 6, а также фактора некроза опухоли.
Благодаря папаину также улучшается циркуляция крови, расщепляются отложения в сосудах. Используется для устранения пролежней и ожогов.
Это вещество – естественный и быстрый очиститель организма от всех отходов. С его помощью можно быстро и эффективно уменьшить концентрацию жировых отложений.
Взаимодействие с другими элементами:
Папаин отлично растворяется в воде и соляных растворах. Активен в присутствии кислот и щелочей.
Признаки нехватки папаина в организме
Папаин не вырабатывается в организме человека и не является для него жизненно необходимым веществом.
Признаки избытка папаина
При сильной передозировке может вызывать тошноту, раздражение слизистой кишечника и расстройство стула. Такое возможно только при чрезмерном принятии пищевых добавок. Естественным путем избыток папаина получить практически невозможно.
Факторы, влияющие на количество папаина в организме
Папаин лучше усваивается, если его принимать за пару часов до еды, или во время приема пищи. При высоких температурах папаин, в отличие от других растительных ферментов, не разрушается.
Папаин для красоты и здоровья
Не меньшей популярностью папаин пользуется и в косметологии. Активное противомикробное действие используется для заживления рубцов. С его помощью борются с веснушками и другой нежелательной пигментацией. Также папаин используется в пиллинге, как мягкое отшелушивающее средство.
Часто папаин применяют в депиллирующих составах. Это вещество разрушает кератин, благодаря чему волосы растут намного медленнее и имеют более тонкую структуру. Входит в состав антицеллюлитных кремов и гелей.
Папаин используется в жидкости для контактных линз, а также в средствах по уходу за зубами. Благодаря этому ферменту, пасты и жидкости могут быстро и эффективно снимать налет, отбеливать и устранять токсины из полости рта.
Также папаин часто добавляют в средства по уходу за жирными волосами. Он хорошо расщепляет жиры и очищает кожу головы. Окрашенные волосы делает блестящими и гладкими. Хорошо проявляет себя в борьбе с перхотью. Входит в состав кремов и масок для ухода за жирной кожей.
Внимание! Информация носит ознакомительный характер и не предназначена для постановки диагноза и назначения лечения. Всегда консультируйтесь с профильным врачом!
Фермент папаин что это
Одной из основных задач Национальной программы «Здоровье» основателем которого является Президент Туркменистана Гурбангулы Беодымухамедов – обеспечение населения страны лекарственными препаратами за счет лекарств отечественного производства,изучение возможности выращивания ценных лекарственных растений в условиях Туркменистана, разработка агротехники возделывания и обеспечение страны медицинскими препаратами и ценным сырьем для промышленности [1].
В современном мире большое внимание уделяется использованию в медицинской практике биологически активных препаратов растительного происхождения.
Мировая медицина ограничиваются от использования антибиотиков, так как снижается иммунная система и приводит к другим сложным последствиям. Ученые полагают, что в будущем антибиотики могут быть заменены супер-антителами, для которых не будет препятствием клеточная стенка, которые смогут проникать внутрь клеток и уничтожать болезнетворные бактерии, вирусы и токсины. Они испытывают технологию модификации антител, которая позволяет им свободно проникать в клетки и покидать их [1, 2–9, 12].
Авторы осознают, что при написании статьи не все задуманное удалось реализовать в полном объеме. Прекрасно понимают, что делают научный обзор по использованию лекарственных энзимов растительного происхождения в широком направлений, поэтому имеется недостатки как в теоретическом плане, так в прикладной, практической части. Но тем не мене вопрос использования нанотехнологии в генной инженерий и, прежде всего расшифровка геном человека позволяют создавать новые лекарственные препараты. Если будем лучше понимать роль генов в развитии болезней и то, как протекают процессы в наших клетках на наноуровне, сможем более целенаправленно вести исследования. С помощью генетики и биотехнологии сможем в будущем более эффективно выявлять причины заболеваний; тем самым исследования в области фармакология – это существенный шаг будет в деле создания инновационных лекарственных средств, устраняющих саму почину болезни. Большой интерес в этом предоставляют протеолитические ферменты растительного происхождения дынного древа [1–4].
Сделанный научно-информационый обзор, собранные материалы и методика подхода могут быть полезны для применения их не только в клинической медицине Туркменистана, но и в других странах мира.
Биотехнологические особенности дынного дерева
Лекарственное сырье. В качестве лекарственного сырья используют высушенный млечный сок – латекс. Коагулированные комья латекса крошат и высушивают на солнце или при легком искусственном подогревании (в последнем случае получают папаин более высокого качества). Полученный латекс растворяют в воде и осаждают спиртом для очистки папаина. В меньших количествах папаин содержится и в других частях растения, в частности в листьях (Folia Caricae Papayae) [2–4, 8–11].
Биологически активные вещества. Методом электрофореза в кислой среде в латексе Carica papaya L. идентифицировано 7 белков: липаза, хитиназа, лизоцим и комплекс протеолитических ферментов:
Папаин (EC 3.4.22.2) – монотиоловая цистеиновая эндопротеаза. По характеру ферментативного действия ее называют «растительным пепсином». Но, в отличие от пепсина, папаин активен не только в кислых, но и в нейтральных и щелочных средах (диапазон рН 3–12, оптимум рН 5) [2–4, 8–11, 17–20].
Химопапаин (EC 3.4.22.6) – монотиоловая цистеиновая протеиназа. Благодаря субстратной специфичности похожа на папаин, но отличается от него электрофоретической подвижностью, стойкостью и растворимостью [2–4, 12, 13].
Протеиназа IV – цистеиновая протеиназа, основная протеиназа латекса, составляет около 30 % присутствующего в нем белка (Buttle D. J. etc., 1989).Проявляет высокую степень гомологии с протеиназой III папайи (81 %), химопапаином (70 %) и папаином (67 %). Очень близка к химопапаину по молекулярной массе и заряду молекулы. Загрязнение этим ферментом химопапаина является причиной его гетерогенности в ходе исследований. M.P. Thomas и соавт. (1994) относят этот фермент к фракции химопапаина М [2–4, 8–11, 15, 16].
Карикаин (EC 3.4.22.30) – наиболее щелочная среди цистеиновых протеиназ латекса папайи. Подобно папаину, он сначала продуцируется в форме неактивного зимогена прокарикаина, содержащего ингибиторный прорегион из 106 N-терминальных аминокислот. Активация фермента заключается в отщеплении прорегиона молекулы без ее последующих конформационных изменений. Строение протеиназ папайи изучено с помощью рентгенструктурного анализа (Maes D. etc., 1996) [2–4, 11–18].
Протеиназа w (эндопептидаза А, пептидаза А) – монотиоловая цистеиновая протеиназа. Это полипептид, содержащий 216 аминокислотных остатков и 3 дисульфидные связи. Для проявления его ферментативной активности важно наличие свободного остатка цистеина в активном центре (Dubois T. etc., 1988). Проявляет высокую степень гомологии с папаином (68,5 %). По специфичности ферментативного действия напоминает папаин, поскольку связывается с субстратом в участках локализации дисульфидных связей. Расщепление происходит тогда, когда в следующей позиции находятся лейцин, валин или треонин. Пептидаза ІІ – щелочная монотиоловая цистеиновая протеиназа. В каталитическом центре содержит дитиоацильную группу.
В латексе неспелых плодов папайи содержатся также ингибиторы протеолитических ферментов: цистатин (ингибитор протеиназ с молекулярной массой 11 262 Да) и белок со свойствами ингибитора цистеиновых протеиназ, молекула которого состоит из 184 аминокислотных остатков, содержит 2 дисульфидные связи и 2 углеводных остатка в позициях Asp84 и Asp90 (Odani S. etc., 1996) [2–4, 12–19].
В спелых плодах дынного дерева содержится 8–12 % сахара, значительное количество витаминов А, В1, В2, С и D, тонизирующие вещества. В листьях папайи выявлены свободные и связанные фенольные соединения, танины, органические кислоты и алкалоиды.
В листьях имеются свободные и связанные фенольные соединения, танины, органические кислоты, стероидные и тритерпеновые сапонины, флавониды, липиды, кумарины, глюкозы, альколоиды, применяемые при лечении туберкулеза и обладающие желче- и мочегонными свойствами [2–4, 11–20].
Фармакологические свойства. Эти протеолитические ферменты растительного происхождения обладают противовоспалительными, антикоголяционными, диградрационными, болеутоляющими, бактерицидными, гемолитивными свойствами. Данные ферменты широко применяются в медицинской практике: офтомологии, хирургии, нейрохирургии, ортопедии, урологии, гастроэнтрологии и др. Они способствуют разрушать белки полупепдидов и аминокислот, растворяют мертвые клетки, при этом не влияя на нормальные.
Модификация комплекса протеиназ папайи синтетическими полимерами. Изучение деструкции ферментных препаратов
Проблема повышения эффективности терапии во многом решается благодаря поиску новых лекарственных средств, важное место среди которых отводится модифицированным производным биокатализаторов с пролонгированным терапевтическим действием [6–8]. Как правило, модификацию ферментов выполняют с использованием растворимых полимеров. В Институте молекулярной биологии и биологической физики АН Грузинской ССР получены водорастворимые и биосовместимые производные полиуретанов и полиамидов [6]. Ранее уже была показана их пригодность для использования в качестве стабилизирующих фермент (трипсин, химотрипсин) носителей [12]. В настоящей работе изучена модификация этими полимерами терапевтически значимого ферментного препарата – комплекса протеиназ папайи [12, 13].
С целью определения целесообразности дальнейшего медико-биологического испытания модифицированных ферментов проведено сравнительное изучение их деструкции под действием экстремальных рН и протеаз. Сопоставление данных о целостности набора молекул ферментного препарата (на основе результатов молекулярно-массового распределения и его каталитической активности) позволяет не только оценить влияние носителя на лекарственный агент, но и сформулировать рекомендации для фармакологического исследования модифицированных препаратов биокатализаторов.
В своей научной статье А.В. Максименко, Л.А. Надирашвили, В.В. Абрамова, Г.С. Еркомаишвили, Р.Д. Кацарава, В.П. Торчилин «Модификация комплекса протеиназ папайи синтетическими полимерами. Изучение деструкции ферментных препаратов» проведённых в Институт экспериментальной кардиологии Всесоюзного кардиологического научного центра АМН СССР и Институт фармакохимии имени И.Р. Кутателадзе АН Грузинской ССР, Тбилиси.
В статье авторами описана химическая модификация комплекса протеиназ папайи синтетическими полимерами – полиамидом, полиуретаном. Изучены свойства модифицированных ферментных препаратов: показана их устойчивость к протеолизу при физиологических условиях и деструкция в щелочной области рН. Модификация комплекса протеиназ папайи усиливает влияние цистеина на стабильность модифицированных препаратов. Осаждение их при кислых значениях рН позволяет легко отделять биокатализатор от реакционной смеси. Обсуждаются перспективы дальнейшего исследования полученных производных.
Условия проведения эксперимента
Реагенты. Нативный препарат комплекса протеиназ папайи (КПЛ) из млечного сока дынного дерева был выделен и охарактеризован по описанному методу [6, 7]. Полимерные носители были получены из Института физиологии им. И.С. Бериташвили АН Грузинской ССР. Ими были водорастворимый полиамид с молекулярной массой 50–60 кД.
(1)
и полиуретан с молекулярной массой 45–50 кД [4]
(2)
Этиловый эфир N-бензол-L-аргинина (ВАЕЕ), L-цистеин, «субтилизин Карлсберг» произведены фирмой Sigma (США). Проназа Е, N-этил-3-(3-диметиламинопропил) карбодиимид, 3-меркапто-1,2-пропандиол – производства фирмы Serva (ФРГ); сефадексG-75 superfine получен от фирмы Pharmacia (Швеция). Все остальные реагенты – продукты производства «Реахим» (СССР) аналитической степени чистоты.
Ковалентное присоединение КПЛ к полимерным носителям. Связывание ферментного препарата с карбоксилсодержащими полимерами проводили через карбодиимидную активацию в соответствии с [8]. 20 мг носителя (полиамида или полиуретана) растворяли в 2 мл 0,01 М раствора трис-буфера, рН 8,0. Затем добавляли 1 мл того же буферного раствора, содержащего 2,5 мг карбодиимида. Смесь инкубировали в течение 30 мин при 4°, после чего добавляли 1 мл раствора того же буфера, содержащего 10 мг нативного КПЛ и 2,5 мг цистеина (для сравнения были выполнены эксперименты и без цистеина в реакционной смеси). Дальнейшую инкубацию проводили в течение 20 ч при 4°. Препараты выделяли методом ультрафильтрации на установке «Amicon» (США) с фильтром ХМ-30, проводя отмывку дистиллированной водой до постоянной оптической плотности промывных вод (220 нм). После этого препараты лиофилизовали. Сравнительное определение молекулярной массы производных проводили методами гель-хроматографии и электрофореза.
Изучение деструкции ферментных препаратов. За деструкцией полимерных образцов cледили, сопоставляя профили элюции проб инкубационной смеси с колонки сефадекса G-75 [9]. Инкубацию препаратов проводили в 0,1 М трис-буфере, рН 7,4 и 0,1 М боратном буфере, рН 9,6, при 30° как в отсутствие, так и в присутствии протеаз – проназы или субтилизина. Концентрация в инкубационной смеси нативного препарата 1 мг/мл, модифицированных – 1–3 мг/мл; проназы 0,2 мг/мл, субтилизина 0,1 мг/мл; носителей (1 мг/мл). Оптическую плотность проб элюата для нативного и модифицированных препаратов регистрировали при 280 нм, для полимерных носителей – при 208 нм.
Определение каталитической активности. Каталитическую активность ферментных препаратов определяли методом измерения начальных скоростей гидролиза 0,05 М раствора ВАЕЕ с 0,1 М КС1 на рН-стате «Radiometer» (Дания) при рН 7,0 и комнатной температуре.
Влияние сульфгидрильных реагентов на каталитическую активность ферментных препаратов исследовали измерением последней до и после (в течение 5 ч) добавления 10 мг/мл меркапто-пропандиола (1 мМ) к растворам биокатализаторов [6].
Измерение термостабильности ферментных препаратов. Растворы нативного и модифицированного полиамидом или полиуретаном (10 мг/мл) комплекса протеиназ папайи инкубировали при 37 °С в 0,1 М буферных растворах, рН 7,4 или рН 9,6, в присутствии 6 мг/мл и в отсутствие цистеина. Периодически отбирали пробы из инкубационной смеси (0,2 мл) и определяли на рН-стате их каталитическую активность, как описано выше.
Титрование сульфгидрильных групп ферментных препаратов. Эксперимент проводили по методу Эллмана [10], как описано ранее [7]. Титрант – 5,5-дитио-бис-2-нитробензойная кислота (получен от фирмы Calbiochem, США), коэффициент экстинкции 13 600 М•см–1 [6, 7, 12. 13].
В результате получены:
Свойства препаратов комплекса протеиназ папайи, модифицированного синтетическими полимерами. В результате ковалентного присоединения КПЛ к полиамиду или полиуретану с носителем связывается около 90 % исходного количества белка (как в присутствии, так и в отсутствие цистеина в инкубационной смеси). Однако проведение модификации в присутствии цистеина обеспечивает получение препаратов с большей величиной остаточной каталитической активности, чем без этой аминокислоты. Так, для препаратов КПЛ-полиамид, полученных с цистеином и без него, остаточная каталитическая активность составляет 70 и 50 %, соответственно, а для КПЛ-поли- уретан – 70 и 20 %. Данные титрования сульфгидрильных групп в ферментных препаратах показывают, что, по-видимому, ковалентного присоединения цистеина к полимерной матрице не происходит (табл. 1). Цистеин способствует только реактивации обратимо инактивированных ферментов [6], повышая, как уже говорилось, остаточную каталитическую активность модифицированных препаратов.
Каталитические параметры – ферментативного гидролиза ВАЕЕ нативным и модифицированным комплексами протеиназ папайи (0,1 М KCI, рН 7,0, комнатная температура)