Фосфатный буфер что это
Фосфатный буфер (PBS): обоснование, приготовление и использование
Содержание:
В фосфатный буфер, BPS или фосфатный буферный растворпредставляет собой буферный и изотонический раствор, функция которого заключается в поддержании pH и осмотического давления, максимально приближенных к естественной биологической среде (физиологическому). Аббревиатура PBS означает физиологический раствор с фосфатным буфером.
Между тем, контроль осмолярности очень важен, особенно при работе с живыми клетками, поскольку плазматические мембраны клеток реагируют в соответствии с концентрацией растворенных веществ, в которых они находятся.
Если клетки переносятся в гипертоническую среду, они становятся обезвоженными, поскольку водный градиент переносится в сторону, где концентрация растворенных веществ выше. Если, с другой стороны, клетки помещают в гипотоническую среду, клетки будут поглощать жидкость до тех пор, пока они не будут лизированы.
Вот почему буфер PBS используется для лабораторных протоколов, требующих обслуживания клеток. in vitro, таким образом клетки не будут повреждены.
PBS состоит из комбинации солей, таких как хлорид натрия, фосфат натрия, хлорид калия и фосфат калия. Состав PBS может варьироваться в зависимости от протокола.
Основа
В основном функция фосфатного буфера заключается в поддержании постоянного физиологического pH вместе с концентрацией электролита, аналогичной той, которая обнаруживается внутри тела.
В этой среде клетки могут оставаться стабильными, так как физиологические условия максимально имитируются.
При необходимости к исходному составу PBS могут быть добавлены другие соединения, например добавление EDTA к буферу полезно для промывания эритроцитов в тесте на перекрестную несовместимость.
EDTA предотвращает расщепление и лизирование фракции комплемента C1, присутствующей в сыворотке, в эритроциты, то есть позволяет избежать ложных результатов несовместимости. Кроме того, ЭДТА помогает диссоциировать клетки.
Подготовка
Количество солей, которое необходимо взвесить для приготовления физиологического раствора с фосфатным буфером, будет зависеть от количества, которое необходимо приготовить:
-Фосфатно-солевой буферный раствор (10X PBS)
На один литр раствора:
Техника подготовки
Поместите тяжелые соли в стакан, добавьте достаточное количество воды (80%) и перемешайте на перемешивающей пластине с помощью магнитной планки, пока соли не растворятся.
Фильтр для удаления нерастворенных частиц. Используйте фильтры с размером пор 0,45 мкм. Автоклав и асептическое распределение в колпаке с ламинарным потоком в стеклянных банках с крышками.
10-кратный раствор (концентрированный) не регулирует pH. Регулировку проводят после разбавления до концентрации буфера 1X PBS (разведение 1:10).
-Буферный фосфатный солевой раствор (1X PBS)
1X PBS можно приготовить непосредственно, взвесив соответствующее количество каждой соли, или его можно приготовить путем разбавления исходного раствора (1:10) стерильной дистиллированной водой.
-Чтобы приготовить один литр физиологического раствора с фосфатным буфером 1X PBS, взвесьте:
Техника подготовки
Действуйте, как описано в концентрированном растворе. Впоследствии необходимо отрегулировать pH. Для этого измерьте pH и, в зависимости от результата, используйте кислоту (HCl) или основание (NaOH), чтобы понизить или повысить pH, соответственно, до 7,4.
Кислота или основание добавляются по каплям, а значение pH раствора контролируется с помощью pH-метра. Отфильтруйте, автоклавируйте и асептически разложите по коническим пробиркам или сосудам по мере необходимости.
-Чтобы приготовить 1X PBS из 10X исходного раствора:
Сделайте раствор 1:10. Например, чтобы приготовить 1 литр 1X PBS, отмерьте 100 мл исходного раствора и добавьте 700 мл стерильной дистиллированной воды. Отрегулируйте pH и залейте количество воды до 1000 мл.
Приготовленный буфер PBS бесцветный и прозрачный.
Растворы для регулирования pH
HCl
На 100 мл 1 молярной HCl (соляной кислоты).
Отмерьте 91 мл дистиллированной воды и поместите его в стакан на 250 мл.
Отмерьте 8,62 мл концентрированной HCl и медленно добавьте ее в стакан с водой (никогда не делайте наоборот). При работе с сильными кислотами (высококоррозионными веществами) примите соответствующие меры биологической безопасности.
Перемешивайте в течение 5 минут, предпочтительно используя пластину для перемешивания с магнитной полосой внутри стакана. Перенести в баллон 100 мл и довести до 100 мл с помощью H2Или дистиллированный.
NaOH
На 100 мл NaOH (гидроксид натрия) 10 моль.
Отмерьте 40 мл дистиллированной воды и поместите ее в стакан на 250 мл. Отмерьте 40 г NaOH и добавьте в воду. Перемешайте, используя пластину для перемешивания с магнитной полосой внутри стакана.
Перенести в мерную колбу на 100 мл и долить до метки дистиллированной водой. Соблюдайте правила биобезопасности, поскольку эта реакция является экзотермической (она выделяет энергию в виде тепла).
Если вы хотите приготовить другое количество фосфатно-солевого раствора, вы можете обратиться к следующей таблице:
Приложения
Он в основном используется в клеточной биологии, иммунологии, иммуногистохимии, бактериологии, вирусологии и исследовательских лабораториях.
Он идеально подходит для промывки клеток центрифугами (эритроцитов), промывки монослоев клеток, методов спектроскопической эллипсометрии, количественного определения бактериальных биопленок, поддержания культур клеток на вирусы, в качестве промывочного раствора в методе непрямой иммунофлуоресценции. и в методах характеристики моноклональных антител.
Он также служит для транспортировки клеток или тканей, в качестве разбавителя для подсчета клеток, приготовления клеточных ферментов (трипсина), в качестве разбавителя для метода осушения биомолекул и для приготовления других реагентов.
С другой стороны, Мартин и др. В 2006 году продемонстрировали, что PBS можно использовать в лабораториях судебной экспертизы, в частности, при извлечении сперматозоидов из вагинальных мазков или вагинальных клеток из мазков полового члена. Таким образом можно установить, были ли сексуальные отношения.
Ограничения
-Некоторые буферы PBS содержат в качестве консерванта вещество, называемое азидом натрия. Это соединение может образовывать взрывчатые вещества при контакте со свинцом или медью. По этой причине следует соблюдать особую осторожность при сливе этого реагента в канализацию. Если его выбрасывают таким образом, необходимо добавить много воды, чтобы максимально разбавить его.
-Цинк не следует добавлять в фосфатный буфер, так как он вызывает выпадение в осадок некоторых солей.
-Ванген и его коллеги в 2018 году определили, что использование PBS не подходит для отмывки первичных клеток острого миелоидного лейкоза (AML), выделенных из периферической крови, из-за того, что многие клетки теряются в результате лизиса, с большим уменьшением количества материала. белок.
Поэтому они определили, что первичные клетки AML не следует мыть PBS после хранения в жидком азоте.
Буферные растворы и их приготовление
 |  | |
 | Гистохимия: методы Гистохимические методы: введение Буферные растворы и их приготовление Выявление нуклеиновых кислот Выявление (суммарное) белков Гистохимические методы для полисахаридов и протеидов Окрашивание жиров и липидов Металлы, анионы, экзогенные пигменты Гистохимия ферментов Гистохимия нервной системы |  |
 |  |
| |
|
